vir-nwТруды по прикладной ботанике, генетике и селекцииProceedings on applied botany, genetics and breeding2227-88342619-0982N.I. Vavilov All-Russian Institute of Plant Genetic Resources10.30901/2227-8834-2026-1-o19vir-nw-2290Research ArticleИЗУЧЕНИЕ И ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ГЕНЕТИЧЕСКИХ РЕСУРСОВ РАСТЕНИЙSTUDYING AND UTILIZATION OF PLANT GENETIC RESOURCESИсточники хозяйственно ценных признаков среди межвидовых гибридов, созданных в ВИР, и их использование в селекции картофеля Республики БеларусьSources of valuable agronomic traits among interspecific hybrids developed at VIR and their utilization in potato breeding in the Republic of Belarushttps://orcid.org/0009-0007-0839-8892ЧашинскийА. В.ChashynskiA. V.

Анатолий Владимирович Чашинский, кандидат сельскохозяйственных наук, доцент, ведущий научный сотрудник

223013 Беларусь, Минская обл., Минский район, Самохваловичи, ул. Ковалева, 2а

Anatol V. Chashynski, Cand. Sci. (Agriculture), Associate Professor, Leading Researcher

2a Kovaleva St., Samokhvalovichy, Minsk District, Minsk Region 223013, Belarus

a.chashinski@rambler.ruhttps://orcid.org/0009-0007-4925-5898КозловВ. А.KozlovV. A.

Виктор Алексеевич Козлов, доктор сельскохозяйственных наук, профессор, заведующий лабораторией

223013 Беларусь, Минская обл., Минский район, Самохваловичи, ул. Ковалева, 2а

Victor A. Kozlov, Dr. Sci. (Agriculture), Professor, Head of a Laboratory

2a Kovaleva St., Samokhvalovichy, Minsk District, Minsk Region 223013, Belarus

wiko@mail.ruhttps://orcid.org/0009-0004-0280-8481БашкоД. В.BashkoD. V.

Диана Владимировна Башко, научный сотрудник

223013 Беларусь, Минская обл., Минский район, Самохваловичи, ул. Ковалева, 2а,

Diana V. Bashko, Researcher,

2a Kovaleva St., Samokhvalovichy, Minsk District, Minsk Region 223013, Belarus

geneticabelbulba@mail.ruhttps://orcid.org/0009-0005-3290-1801РусецкийН. В.RusetskiN. V.

Николай Владимирович Русецкий, кандидат биологических наук, доцент, ведущий научный сотрудник

223013 Беларусь, Минская обл., Минский район, Самохваловичи, ул. Ковалева, 2а

Nicolai V. Rusetski, Cand. Sci. (Biology), Associate Professor, Leading Researcher

2a Kovaleva St., Samokhvalovichy, Minsk District, Minsk Region 223013, Belarus

nicrw@mail.ruhttps://orcid.org/0009-0005-7029-8150РодькинаИ. А.RodkinaI. A.

Инна Александровна Родькина, кандидат биологических наук, доцент, ведущий научный сотрудник

223013 Беларусь, Минская обл., Минский район, Самохваловичи, ул. Ковалева, 2а

Inna A. Rodkina, Cand. Sci. (Biology), Associate Professor, Leading Researcher

2a Kovaleva St., Samokhvalovichy, Minsk District, Minsk Region 223013, Belarus

rodkina@tut.byhttps://orcid.org/0000-0002-8515-7941ЧалаяН. А.ChalayaN A.

Надежда Александровна Чалая, кандидат сельскохозяйственных наук, старший научный сотрудник, ВИР

190000 Россия, Санкт-Петербург, ул. Б. Морская, 42, 44

Nadezhda A. Chalaya, Cand. Sci. (Agriculture), Senior Researcher,  VIR

42, 44 Bolshaya Morskaya Street, St. Petersburg 190000, Russia

n.chalaya@vir.nw.ruhttps://orcid.org/0000-0002-2743-068XРогозинаЕ. В.RogozinaE. V.

Елена Вячеславовна Рогозина, доктор биологических наук, ведущий научный сотрудник,  ВИР

190000 Россия, Санкт-Петербург, ул. Б. Морская, 42, 44

Elena V. Rogozina, Dr. Sci. (Biology), Leader Researcher,  VIR

42, 44 Bolshaya Morskaya Street, St. Petersburg 190000, Russia

rogozinaelena@gmail.comНаучно-практический центр Национальной академии наук Беларуси по картофелеводству и плодоовощеводствуБеларусьScientific and Practical Center of the National Academy of Sciences of Belarus for Potato, Fruit and Vegetable GrowingBelarusФедеральный исследовательский центр Всероссийский институт генетических ресурсов растений имени Н.И. ВавиловаРоссияN.I. Vavilov All-Russian Institute of Plant Genetic ResourcesRussian Federation20263003202618717487Copyright © Чашинский А.В., Козлов В.А., Башко Д.В., Русецкий Н.В., Родькина И.А., Чалая Н.А., Рогозина Е.В., 20262026Чашинский А.В., Козлов В.А., Башко Д.В., Русецкий Н.В., Родькина И.А., Чалая Н.А., Рогозина Е.В.Chashynski A.V., Kozlov V.A., Bashko D.V., Rusetski N.V., Rodkina I.A., Chalaya N.A., Rogozina E.V.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://elpub.vir.nw.ru/jour/article/view/2290

Для повышения эффективности картофелеводства необходимо вести постоянную работу по созданию новых высокопродуктивных сортов с комплексом хозяйственно ценных признаков. Эта работа возможна лишь при наличии достаточного количества нового генетически разнообразного материала для селекции картофеля. Поэтому пополнение, изучение и сохранение коллекций генетических ресурсов картофеля в условиях Республики Беларусь для обеспечения отечественной селекции картофеля новыми источниками хозяйственно ценных признаков является важной задачей. Целью наших исследований являлось изучение межвидовых гибридов картофеля, созданных в отделе генетических ресурсов картофеля Всероссийского института генетических ресурсов растений имени Н.И. Вавилова (ВИР), по основным хозяйственно ценным признакам (продуктивность, устойчивость к вирусным болезням, фитофторозу, черной ножке, содержание крахмала, пригодность к промышленной переработке на картофелепродукты и др.) для последующего вовлечения в селекционный процесс и маркерный анализ на наличие эффективных аллелей генов, связанных с синтезом углеводов.

В результате проведенных исследований выделены источники устойчивости к оомицету Phytophthora infestans (Mont.) de Bary, возбудителям черной ножки, вирусным болезням, источники высокой продуктивности и пригодности к промышленной переработке на картофелепродукты после 5 месяцев холодного хранения без рекондиционирования. По результатам ПЦР-анализа выделены гибриды с наличием маркеров Stp23-8b, InvGF-4d и InvGF-4b эффективных аллелей генов, отвечающих за синтез углеводов в клубнях. Выделенные гибриды рекомендуются в качестве источников хозяйственно ценных признаков для селекции картофеля.

Enhancing the efficiency of potato farming requires continuous development of new highly productive cultivars with a set of valuable agronomic traits. Such work is impossible without a sufficient stock of new, genetically diverse source material for potato breeding. Therefore, expanding, studying, and preserving potato genetic resources collections in the Republic of Belarus is an important task to provide the domestic potato breeding practice with new sources of valuable traits. The objective of this research was to examine interspecific potato hybrids developed at the Potato Genetic Resources Department of the N.I. Vavilov All-Russian Institute of Plant Genetic Resources (VIR) for their key agronomic characters (productivity; resistance to viruses, late blight, and blackleg; starch content; suitability for industrial processing into potato products, etc.) through breeding-oriented assessment and marker analysis searching for effective alleles of genes associated with carbohydrate synthesis.

The research identified sources of resistance to the oomycete Phytophthora infestans (Mont.) de Bary, blackleg pathogens, and viruses, as well as sources of high productivity and suitability for industrial processing into potato products after five months of cold storage without reconditioning. The PCR analysis helped to identify hybrids carrying the markers Stp23-8b, InvGF-4d, and InvGF-4b – effective alleles of genes responsible for carbohydrate synthesis in tubers. The identified hybrids are recommended as sources of valuable agronomic traits for potato breeding practice.

источники хозяйственно ценных признаковустойчивостьфитофторозчерная ножкавирусные болезнипродуктивностьпригодность к промышленной переработкеvaluable agronomic trait sourcesresistancePhytophthorablackleg pathogensviral diseasesproductivitysuitability for industrial processingРабота выполнялась в рамках Государственной программы «Научно-инновационная деятельность Национальной академии наук Беларуси» на 2021–2025 гг., подпрограммы 3 «Изучение, идентификация и рациональное использование коллекций генетических ресурсов растений»; создание межвидовых гибридов картофеля в отделе генетических ресурсов картофеля ВИР выполнено в рамках государственного задания согласно тематическому плану ВИР по проекту № FGEM-2025-0005 «Совершенствование подходов и методов ex situ сохранения идентифицированного генофонда клубнеплодных культур (картофель, топинамбур) и их диких родичей, разработка технологий их эффективного использования в селекции».The research work was performed out within the framework of the State Program “Scientific and Innovative Activities of the National Academy of Sciences of Belarus” for 2021–2025, subprogram 3 “Study, Identification, and Rational Use of Collections of Plant Genetic Resources”; the development of interspecific potato hybrids was carried out within the framework of the state task according to the theme plan of VIR, Project No. FGEM-2025-0005 “Improving approaches and methods for ex situ conservation of the identified genetic diversity of tuber crops (potato, and Jerusalem artichoke) and their wild relatives, and developing technologies for their effective use in breeding”.ReferencesАндрюшина Н.А., Бацанов Н.С., Будина Л.В., Гриневич В.Ф., Ильин В.Ф., Клюквина Ю.В., Шмыгля В.А., Яшина И.М. Методика исследований по культуре картофеля. Москва: ВАСХНИЛ; 1967.Andryushina N.A., Batsanov N.S., Budina L.V., Grinevich V.F., Ilyin V.F., Klyukvina Yu.V., Shmyglya V.A., Yashina I.M. Methods of research on the potato crop (Metodika issledovaniy po culture kartofelya). Moscow: VASKhNIL; 1967. [in Russian]Банадысев С.А., Старавойтов А.М., Колядка И.И., Маханько В.Л., Фандо В.В., Козлова Л.Н., Колядка О.М., Незаконова Л.В., Гончарова Н.Н., Вологдина Л.Н., Стадников И.А., Грибко А.П. Методические рекомендации по специализированной оценке сортов картофеля. Минск: Министерство сельского хозяйства и продовольствия Республики Беларусь; 2003.Banadysev S.A., Staravoitov A.M., Kolyadka I.I., Makhanko V.L., Fando V.V., Kozlova L.N., Kolyadka O.M., Azarodova L.V., Goncharova N.N., Vologdina L.N., Stadnikov I.A., Gribko A.P. Guidelines for the specialized assessment of potato cultivars (Metodicheskiye rekomendatsii po spetsializirovannoy otsenke sortov kartofelya). Minsk: Ministry of Agriculture and Food of the Republic of Belarus; 2003. [in Russian]Блоцкая Ж.В. Вирусные, вироидные и фитоплазменные болезни картофеля. Минск: Тэхналогiя; 2000.Blotskaya J.V. Viral, viroid and phytoplasma diseases of potatoes (Virusnye, viroidnye i fitoplazmennye bolezni kartofelya). Minsk: Technalogia; 2000. [in Russian]Букасов С.М., Зыкин А.Г., Бавыко Н.Ф., Костина Л.И., Руденко А.И., Сорокин А.И. Методические указания по поддержанию и изучению мировой коллекции картофеля / под ред. С.М. Букасова. Ленинград: ВИР; 1976.Bukasov S.M., Zykin A.G., Bavyko N.F., Kostina L.I., Rudenko A.I., Sorokin A.I. Methodological guidelines for the maintenance and study of the world potato collection. S.M. Bukasov (ed.). Leningrad: VIR; 1976. [in Russian]Бусько И.И., Леванцевич И.В., Михаленя О.Н., Манцевич Л.А. Особенности проявления фитофтороза картофеля в вегетационный период 2013 года. Картофелеводство. Сборник научных трудов. 2014;22:58-62.Busko I.I., Levantsevich I.V., Mihalenya O.N., Mantsevich L.A. Features of late blight during the growing season-2013. Potato-Growing. Proceedings. 2014;22:58-62. [in Russian]Методы оценки картофеля, овощных и плодовых культур на устойчивость к болезням: методические рекомендации / под ред. Н.А. Дорожкина, В.Г. Иванюка. Минск: Белорусский НИИ картофелеводства и плодоовощеводства; 1987.Dorozhkin N.A., Ivanyuk V.G. (eds). Methods for assessing potato, vegetable and fruit crops for disease resistance: methodological recommendations (Metody otsenki kartofelya, ovoshchnykh i plodovykh kultur na ustoychivost k boleznyam: metodtcheskiye rekomendatsii). Minsk: Belorussian Research Institute of Potato, Fruit and Vegetable Growing; 1987. [in Russian]Fry W.E. Quantification of general resistance of potato cultivars and fungicide effects for integrated control of late blight. Phytopathology. 1978;68(11):1650-1655. DOI: 10.1094/Phyto-68-1650Fry W.E. Quantification of general resistance of potato cultivars and fungicide effects for integrated control of late blight. Phytopathology. 1978;68(11):1650-1655. DOI: 10.1094/Phyto-68-1650Игнатов А.Н., Панычева Ю.С., Воронина М.В., Джалилов Ф.С. Бактериозы картофеля в Российской Федерации. Картофель и овощи. 2018;(1):3-7. DOI: 10.25630/PAV.2018.1.17453Ignatov A.N., Panycheva Yu.S., Voronina M.V., Dzhalilov F.S. Potato bacterial pathogens in Russia. Potato and Vegetables. 2018;(1):3-7. [in Russian]. DOI: 10.25630/PAV.2018.1.17453Инструкция на наборы по выделению ДНК «НУКЛЕОСОРБ» Тип С: [сайт]. URL: http://primetech.by/index.php?route=module/downloads [дата обращения: 09.03.2021].Instruction for NUCLEOSORB Type C DNA isolation kits (Instruktsiya na nabory po vydeleniyu DNK “NUKLEOSORB” Tip S): [website]. [in Russian]. URL: http://primetech.by/index.php?route=module/downloads [дата обращения: 09.03.2021].Инструкция по использованию иммуноферментного диагностического набора для определения вирусов картофеля. Москва; Коренево; 1993.Instruction for using the enzyme immunoassay diagnostic kit for the determination of potato viruses (Instruktsiya po ispolzovaniyu immunofermentnogo diagnosticheskogo nabora dlya opredeleniya virusov kartofelya). Moscow; Korenevo; 1993. [in Russian]Иванюк В.Г., Банадысев С.А., Журомский Г.К. Защита картофеля от болезней, вредителей и сорняков. Минск; 2005.Ivanyuk V.G., Banadysev S.A., Zhuromsky G.K. Protection of potatoes from diseases, pests and weeds (Zashchita kartofelya ot bolezney, vrediteley i sornyakov). Minsk; 2005. [in Russian]Иващенко А.Д., Шерстюкова Т.П., Хасбиуллина О.И., Рогозина Е.В. Проявление селекционно ценных признаков у межвидовых гибридов картофеля из коллекции ВИР в условиях Камчатского края. Труды по прикладной ботанике, генетике и селекции. 2024;185(1):51-63. DOI: 10.30901/2227-8834-2024-1-51-63Ivashchenko A.D., Sherstyukova T.P., Khasbiullina O.I., Rogozina E.V. Breeding value of potato hybrid clones from the VIR collection revealed in the environments of Kamchatka Territory. Proceedings on Applied Botany, Genetics and Breeding. 2024;185(1):51-63. [in Russian]. DOI: 10.30901/2227-8834-2024-1-51-63Израильский В.П. Бактериальные болезни растений. Москва: Колос; 1979.Izrailsky V.P. Bacterial diseases of plants (Bakterialnye bolezni rasteniy). Moscow: Kolos; 1979. [in Russian]Хлопюк М.С., Чалая Н.А., Рогозина Е.В. Стабильность агрономически ценных признаков у клонов межвидовых гибридов картофеля в условиях Центрального региона европейской территории России. Труды по прикладной ботанике, генетике и селекции. 2021;182(4):79-89. DOI: 10.30901/2227-8834-2021-4-79-89Khlopyuk М.S., Chalaya N.A., Rogozina E.V. Stability of agronomic traits in interspecific hybrid potato clones in the Central Region of European Russia. Proceedings on Applied Botany, Genetics and Breeding. 2021;182(4):79-89. [in Russian]. DOI: 10.30901/2227-8834-2021-4-79-89Колядко И.И., Незаконова Л.В., Маханько В.В. Использование образцов коллекции Всероссийского института растениеводства им. Н.И. Вавилова (ВИР) в селекции картофеля в Беларуси. Труды по прикладной ботанике, генетике и селекции. 2007;163:186-192.Kolyadko I., Nezakonova L., Makhan’ko V. The use of accessions from Vavilov Institute in potato breeding program in Belarus. Proceedings on Applied Botany, Genetics and Breeding. 2007;163:186-192. [in Russian]Козлов В.А., Русецкий Н.В., Чашинский А.В., Игнатова Н.М. Использование генофонда картофеля ВИР в создании исходного материала, устойчивого к вирусным болезням, фитофторозу, с повышенным содержанием крахмала. Труды по прикладной ботанике, генетике и селекции. 2007;163:179-186.Kozlov V., Rusetski N., Chashinski A., Ignatova N. The use of genetic resources from potato collection of N.I. Vavilov Institute of Plant Industry in parental line breeding with resistance to virus diseases, late blight and high starch content. Proceedings on Applied Botany, Genetics and Breeding. 2007;163:179-186. [in Russian]Козлов В.А., Рогозина Е.В. Созданные в ВИР межвидовые гибриды картофеля – источники ценных признаков для селекции картофеля в Белоруссии. Труды по прикладной ботанике, генетике и селекции. 2014;175(2):61-72.Kozlov V.A., Rogozina E.V. Interspecific potato hybrid clones developed at VIR as sources of valuable traits for potato breeding in Belarus. Proceedings on Applied Botany, Genetics and Breeding. 2014;175(2):61-72. [in Russian]Li L., Paulo M.J., Strahwald J., Lübeck J., Hofferbert H.R., Tacke E. et al. Natural DNA variation at candidate loci is associated with potato chip color, tuber starch content, yield and starch yield. Theoretical and Applied Genetics. 2008;116(8):1167-1181. DOI: 10.1007/s00122-008-0746-yLi L., Paulo M.J., Strahwald J., Lübeck J., Hofferbert H.R., Tacke E. et al. Natural DNA variation at candidate loci is associated with potato chip color, tuber starch content, yield and starch yield. Theoretical and Applied Genetics. 2008;116(8):1167-1181. DOI: 10.1007/s00122-008-0746-yLi L., Strahwald J., Hofferbert H.R., Lübeck J., Tacke E., Junghans H. et al. DNA variation at the invertase locus invGE/GF is associated with tuber quality traits in populations of potato breeding clones. Genetics. 2005;170(2):813-821. DOI: 10.1534/genetics.104.040006Li L., Strahwald J., Hofferbert H.R., Lübeck J., Tacke E., Junghans H. et al. DNA variation at the invertase locus invGE/GF is associated with tuber quality traits in populations of potato breeding clones. Genetics. 2005;170(2):813-821. DOI: 10.1534/genetics.104.040006Li L., Tacke E., Hofferbert H.R., Lübeck J., Strahwald J., Draffehn A.M. et al. Validation of candidate gene markers for marker-assisted selection of potato cultivars with improved tuber quality. Theoretical and Applied Genetics. 2013;126(4):1039-1052. DOI: 10.1007/s00122-012-2035-zLi L., Tacke E., Hofferbert H.R., Lübeck J., Strahwald J., Draffehn A.M. et al. Validation of candidate gene markers for marker-assisted selection of potato cultivars with improved tuber quality. Theoretical and Applied Genetics. 2013;126(4):1039-1052. DOI: 10.1007/s00122-012-2035-zПискун Г.И. Приоритетные направления селекции картофеля в связи с изменением климата. Картофелеводство. 2021;29(1):38-43. DOI: 10.47612/0134-9740-2021-29-38-43Piskun G.I. Priority areas of potato selective breeding in connection with climate change. Potato Growing. 2021;29(1):38-43. [in Russian]. DOI: 10.47612/0134-9740-2021-29-38-43Рогозина Е.В., Бирюкова В.А., Симаков Е.А., Жарова В.А., Чалая Н.А., Кузнецова М.А. и др. Межвидовые гибриды как родительские формы для упреждающей селекции картофеля на устойчивость к болезням и вредителям. Достижения науки и техники АПК. 2018;32(1):26-31. DOI: 10.24411/0235-2451-2018-10105Rogozina E.V., Biryukova V.A., Simakov E.A., Zharova V.A., Chalaya N.A., Kuznetsova M.A. et al. Interspecific hybrids as parental lines in anticipatory breeding for potato resistant to disease and pests. Achievements of Science and Technology of AIC. 2018;32(1):26-31). [in Russian]. DOI: 10.24411/0235-2451-2018-10105Руденко А.И., Ковальчук Г.Н. Размещение посевов и урожай картофеля в СССР в связи с климатическими условиями. В кн.: Культурная Флора СССР. Т. 9. Картофель / под ред. С.М. Букасова. Ленинград: Колос; 1971. С.417-429.Rudenko A.I., Kovalchuk G.N. Crop arrangement and harvests of potato in the USSR in the context of climate conditions (Razmeshcheniye posevov i urozhay kartofelya v SSSR v svyazi s klimaticheskimi usloviyami). In: S.M. Bukasov (ed.). Flora of Cultivated Plants. Vol. 9. Potato. Leningrad: Kolos; 1971. p.417-429. [in Russian]Schuhmann P. Auswirkungen des Virusbesatzen auf die Höhe des Knollenertrages. Kartoffelbau. 1994;45(6):238-241. [in German]Schuhmann P. Auswirkungen des Virusbesatzen auf die Höhe des Knollenertrages. Kartoffelbau. 1994;45(6):238-241. [in German]Шпаар Д., Быкин А., Дрюгер Д., Захаренко А., Иванюк В., Каленская С., Коновалова В., Литун А., Мухин К., Новожилов К., Постников В., Тарасенко Г., Цыганков В., Щербаков Г. Картофель / под ред. Д. Шпаара. Минск; 2004.Spaar D., Bykin A., Drüger D., Zakharenko A., Ivanyuk V., Kalenskaya S., Konovalova V., Litun A., Mukhin K., Novozhilov K., Postnikov V., Tarasenko G., Tsygankov V., Shcherbakov G. Potatoes (Kartofel). D. Spaar (ed.). Minsk; 2004. [in Russian]Симаков Е.А., Жарова В.А., Митюшкин А.В., Бирюкова В.А., Рогозина Е.В., Киру С.Д. Использование генетических ресурсов картофеля для повышения эффективности селекции. Труды по прикладной ботанике, генетике и селекции. 2017;178(2):113-121. DOI: 10.30901/2227-8834-2017-2-113-121Simakov E.A., Zharova V.A., Mityushkin A.V., Biryukova V.A., Rogozina E.V., Kiru S.D. The use of genetic resources to increase the efficiency of potato breeding. Proceedings on Applied Botany, Genetics and Breeding. 2017;178(2):113-121. [in Russian]. DOI: 10.30901/2227-8834-2017-2-113-121Склярова Н.П., Черепанова Р.В. Методические указания по определению иммунитета и сверхчувствительности селекционного материала картофеля к вирусам Х и У и полевой устойчивости к вирусным болезням. Москва; Красково: НИИ картофельного хозяйства; 1978.Sklyarova N.P., Cherepanova R.V. Guidelines for determining immunity and hypersensitivity of potato breeding material to X and Y viruses and field resistance to viral diseases (Metodicheskiye ukazaniya po opredeleniyu immuniteta i sverkhchuvstvitelnosti selektsionnogo materiala kartofelya k virusam X i Y i polevoy ustoychivosti k virusnym boleznyam). Moscow; Kraskovo: Research Institute of Potato Farming; 1978. [in Russian]Slater A.T., Cogan N.O.I., Hayes B.J., Schultz L., Dale M.F.B., Bryan G.J. et al. Improving breeding efficiency in potato using molecular and quantitative genetics. Theoretical and Applied Genetics. 2014;127(11):2279-2292. DOI: 10.1007/s00122-014-2386-8Slater A.T., Cogan N.O.I., Hayes B.J., Schultz L., Dale M.F.B., Bryan G.J. et al. Improving breeding efficiency in potato using molecular and quantitative genetics. Theoretical and Applied Genetics. 2014;127(11):2279-2292. DOI: 10.1007/s00122-014-2386-8

The authors declare that there are no conflicts of interest present.