vir-nwТруды по прикладной ботанике, генетике и селекцииProceedings on applied botany, genetics and breeding2227-88342619-0982N.I. Vavilov All-Russian Institute of Plant Genetic Resources10.30901/2227-8834-2022-2-32-42vir-nw-1276Research ArticleИЗУЧЕНИЕ И ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ГЕНЕТИЧЕСКИХ РЕСУРСОВ РАСТЕНИЙSTUDYING AND UTILIZATION OF PLANT GENETIC RESOURCESХарактеристика генетической коллекции сортов земляники (Fragaria × ananassa Duch.) по компонентам антиоксидантного комплекса плодовDescription of the genetic collection of strawberry (Fragaria × ananassa Duch.) cultivars according to the components of their fruit antioxidant complexhttps://orcid.org/0000-0001-5045-384XЖбановаЕ. В.ZhbanovaE. V.

Жбанова Екатерина Викторовна - доктор сельскохозяйственных наук, ведущий научный сотрудник.

393774 ,  Тамбовская  область,  Мичуринск,  ул. Мичурина, 30.

Ekaterina V. Zhbanova - Dr. Sci. (Agriculture), Leading Researcher, I.V. Michurin Federal Science Center.

30 Michurina St., Michurinsk, Tambov Province 393774.

shbanovak@yandex.ruhttps://orcid.org/0000-0003-1626-840XЛукъянчукИ. В.Luk’yanchukI. V.

Лукъянчук Ирина Васильевна - кандидат сельскохозяйственных наук, старший научный сотрудник.

393774 ,  Тамбовская  область,  Мичуринск,  ул. Мичурина, 30.

Irina V. Luk’yanchuk - Cand. Sci. (Agriculture), Senior Researcher, I.V. Michurin Federal Science Center.

30 Michurina St., Michurinsk, Tambov Province 393774.

irina.lk2011@yandex.ruФедеральный научный центр имени И.В. МичуринаРоссияI.V. Michurin Federal Science CenterRussian Federation20222406202218323242Copyright © Жбанова Е.В., Лукъянчук И.В., 20222022Жбанова Е.В., Лукъянчук И.В.Zhbanova E.V., Luk’yanchuk I.V.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://elpub.vir.nw.ru/jour/article/view/1276Актуальность

Актуальность. Показатели качества плодов земляники, их технологические и лечебно-профилактические свойства во многом обусловливаются химическим составом. При создании новых сортов необходимо выявление источников высокого уровня накопления макро- и микронутриентов в плодах.

Материалы и методы

Материалы и методы. Объектами исследований являлись плоды земляники полиморфной генетической коллекции, собранной в лаборатории частной генетики и селекции Федерального научного центра имени И.В. Мичурина и включающей созданные в учреждении сорта, элитные и отборные формы, а также интродуцированные сорта отечественной и зарубежной селекции. Изучение показателей химического состава (содержание витамина С, антоцианов) осуществлялось на приборно-аналитической базе лаборатории биохимии и пищевых технологий согласно стандартным методикам. Исследования проводились в период 1994–2020 гг.

Результаты и выводы

Результаты и выводы. Определены диапазоны изменчивости накопления основных компонентов антиоксидантного комплекса в плодах земляники в условиях Центрально-Черноземного региона (Мичуринск): аскорбиновой кислоты – 30,1–102,3 мг/100 г; антоцианов – 3,6–124,5 мг/100 г. Проведено ранжирование сортов по рассматриваемым химическим  компонентам.  Большинство  исследованных  сортов  (85,6%)  отнесено  в группу  «среднее  содержание витамина С»,  от  50,1–90,0 мг/100 г.  Основная  масса  (85,6%)  исследованных  сортов  накапливала  антоцианы  до 70,0 мг/100 г. Выделены ценные источники высокого накопления: витамина С (выше 90,1 мг/100 г) –‘Кокинская заря’, ‘Лировидная’, ‘Сударушка’, ‘Zephyr’; антоцианов (выше 90,1 мг/100 г) – ‘Алена’, ‘Источник’, ‘Памяти Зубова’, ‘Привлекательная’, ‘Рубиновый кулон’, ‘Торпеда’, ‘Фейерверк’, эл. с. 56-5 («Рубиновый каскад»). Выделенные сорта представляют интерес как для потребления свежих плодов в качестве высоковитаминной продукции, так и в качестве исходного материала при создании генотипов с улучшенным химическим составом.

Background

Background. Quality indicators, medicinal and prophylactic properties of strawberry fruits are largely determined by their chemical composition. In order to improve the breeding work, it is necessary to look for the sources of high-level accumulation of macro- and micronutrients in fruits.

Materials and methods

Materials and methods. Fruits of 101 accessions from the genetic collection of introduced foreign and domestic cultivars, elite and selected forms held by the I.V. Michurin Federal Science Center were used as the target research material. All of them were grown on the experimental plantations from 1994 through 2020. Their chemical composition (ascorbic acid and anthocyanin contents) was analyzed at the Laboratory of Biochemistry and Food Technologies according to the standard methods.

Results and conclusions

Results and conclusions. The ranges of variability in the accumulation of primary components of the antioxidant complex in strawberry fruits in the environments of the Central Black Earth Region (Michurinsk) were measured: 30.1–102.3 mg/100 g for ascorbic acid and 3.6–124.5 mg/100 g for anthocyanins. The cultivars were ranked according to the analyzed chemical components. A majority of them were classified into the group with average vitamin C content (50.1–90.0 mg/100 g). The largest part (85.6%) of the studied cultivars accumulated anthocyanins within the range of 30.0–70.0 mg/100 g. Valuable genotypes with high levels of ascorbic acid (above 90.1 mg/100 g) were identified: cvs. ‘Kokinskaya zarya’, ‘Lirovidnaya’, ‘Sudarushka’ and ‘Zephyr’. As for anthocyanins (above 90.1 mg/100 g), cvs. ‘Alena’, ‘Istochnik’, ‘Pamyati Zubova’, ‘Privlecatelnaya’, ‘Rubinovy kulon’, ‘Torpeda’ and ‘Feyerverk’, plus the elite seedling 56-5 (“Rubinovy kaskad”), showed the best results. The identified genotypes are of interest both for consumers, as they yield highly vitaminized fresh fruits, and for breeders as source material for the development of cultivars with improved chemical composition.

химический составбиологически активные веществааскорбиновая кислотаантоцианыchemical compositionbioactive substancesascorbic acidanthocyaninsРабота выполнена при финансовой поддержке проекта Минобрнауки России «Национальная сетевая коллекция генетических ресурсов растений для эффективного научно-технологического развития РФ в сфере генетических технологий» по соглашению № 075-15-2021-1050 от 28.09.2021 г. Авторы благодарят рецензентов за их вклад в экспертную оценку этой работы.This work was supported by the Ministry of Science and Higher Education of Russia under Agreement No. 075-15-2021-1050 of Sept. 28, 2021 within the framework of the project entitled “National network collection of plant genetic resources for effective scientific and technical development of the Russian Federation in the sphere of genetic technologies”. The authors thank the reviewers for their contribution to the peer review of this work.ReferencesАкимов М.Ю., Жбанова Е.В., Макаров В.Н., Перова И.Б., Шевякова Л.В., Вржесинская О.А. и др. Пищевая ценность плодов перспективных сортов земляники. Вопросы питания. 2019;88(2):64-72. DOI: 10.24411/0042-8833-2019-10019Akimov M.Yu., Zhbanova E.V., Makarov V.N., Perova I.B., Shevyakova L.V., Vrzhesinskaya O.A. et al. Nutrient value of fruit in promising strawberry varieties. Problems of Nutrition. 2019;88(2):64-72. [in Russian] DOI: 10.24411/0042-8833-2019-10019Commission Directive 2008/100/EC of 28 October 2008 amending Council Directive 90/496/EEC on nutrition labelling for foodstuffs as regards recommended daily allowance, energy conversion factors and definitions. Official Journal of the European Union. 2008;1/285:9-12. Available from: https://www.fsai.ie/uploadedFiles/Dir2008_100.pdf [accessed Dec. 12, 2021].Commission Directive 2008/100/EC of 28 October 2008 amending Council Directive 90/496/EEC on nutrition labelling for foodstuffs as regards recommended daily allowance, energy conversion factors and definitions. Official Journal of the European Union. 2008;1/285:9-12. Available from: https://www.fsai.ie/uploadedFiles/Dir2008_100.pdf [accessed Dec. 12, 2021].Cordenunsi B.R., Oliveira do Nascimento J.R., Genovese M.I., Lajolo F.M. Influence of cultivar on quality parameters and chemical composition of strawberry fruits grown in Brazil. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 2002;50(9):2581-2586. DOI: 10.1021/jf011421iCordenunsi B.R., Oliveira do Nascimento J.R., Genovese M.I., Lajolo F.M. Influence of cultivar on quality parameters and chemical composition of strawberry fruits grown in Brazil. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 2002;50(9):2581-2586. DOI: 10.1021/jf011421iDa Silva F.L., Escribano-Bailón M.T., Pérez Alonso J.J., Rivas-Gonzalo J.C., Santos-Buelga C. Anthocyanin pigments in strawberry. LWT – Food Science and Technology. 2007;40(2):374-382. DOI: 10.1016/j.lwt.2005.09.018Da Silva F.L., Escribano-Bailón M.T., Pérez Alonso J.J., Rivas-Gonzalo J.C., Santos-Buelga C. Anthocyanin pigments in strawberry. LWT – Food Science and Technology. 2007;40(2):374-382. DOI: 10.1016/j.lwt.2005.09.018Da Silva Pinto M., Lajolo F.M., Genovese M.I. Bioactive compounds and quantification of total ellagic acid in strawberries (Fragaria × ananassa Duch.). Food Chemistry. 2007;107(4):1629-1635. DOI: 10.1016/j.food-chem.2007.10.038Da Silva Pinto M., Lajolo F.M., Genovese M.I. Bioactive compounds and quantification of total ellagic acid in strawberries (Fragaria × ananassa Duch.). Food Chemistry. 2007;107(4):1629-1635. DOI: 10.1016/j.food-chem.2007.10.038Diamanti J., Battino M., Mezzetti B. Breeding for fruit nutritional and nutraceutical quality. In: M.A. Jenks P.J. Bebeli (eds). Breeding for Fruit Quality. Hoboken, NJ: John Wiley & Sons, Inc.; 2011. p.61-79. DOI: 10.1002/9780470959350Diamanti J., Battino M., Mezzetti B. Breeding for fruit nutritional and nutraceutical quality. In: M.A. Jenks P.J. Bebeli (eds). Breeding for Fruit Quality. Hoboken, NJ: John Wiley & Sons, Inc.; 2011. p.61-79. DOI: 10.1002/9780470959350Dzhanfezova T., Barba-Espín G., Müller R., Joernsgaard B., Hegelund J.N., Madsen B. et al. Anthocyanin profile, antioxidant activity and total phenolic content of a strawberry (Fragaria × ananassa Duch.) genetic resource collection. Food Bioscience. 2020;36:100620. DOI: 10.1016/j.fbio.2020.100620Dzhanfezova T., Barba-Espín G., Müller R., Joernsgaard B., Hegelund J.N., Madsen B. et al. Anthocyanin profile, antioxidant activity and total phenolic content of a strawberry (Fragaria × ananassa Duch.) genetic resource collection. Food Bioscience. 2020;36:100620. DOI: 10.1016/j.fbio.2020.100620Методы биохимического исследования растений / под ред. А.И. Ермакова. Ленинград; 1987.Ermakov A.I. (ed.). Methods of biochemical research on plants (Metody biokhimicheskogo issledovaniya rasteniy). Leningrad; 1987. [in Russian]FAOSTAT. Food and Agriculture Organization of the United Nations: [site]. Available from: https://www.fao.org/faostat/enFAOSTAT. Food and Agriculture Organization of the United Nations: [site]. Available from: https://www.fao.org/faostat/enFruitNews: [site]. URL: https://fruitnews.ru/analytics/49610-indexbox-mirovoj-rynok-zemlyaniki-vstoimostnom-vyrazhenii-dostig-15-9-mlrd.html [дата обращения 12.02.2021].FruitNews: [site]. URL: https://fruitnews.ru/analytics/49610-indexbox-mirovoj-rynok-zemlyaniki-vstoimostnom-vyrazhenii-dostig-15-9-mlrd.html [дата обращения 12.02.2021].Garzón G.A., Wrolstad R.E. Comparison of the stability of pelargonidin-based anthocyanins in strawberry juice and concentrate. Journal of Food Science. 2020;67(4):1288-1299. DOI: 10.1111/j.1365-2621.2002.tb10277.xGarzón G.A., Wrolstad R.E. Comparison of the stability of pelargonidin-based anthocyanins in strawberry juice and concentrate. Journal of Food Science. 2020;67(4):1288-1299. DOI: 10.1111/j.1365-2621.2002.tb10277.xGiampieri F., Tulipani S., Alvarez-Suarez J.M., Quiles J.L., Mezzetti B., Battino M. The strawberry: composition, nutritional quality, and impact on human health. Nutrition. 2012;28(1):9-19. DOI: 10.1016/j.nut.2011.08.009Giampieri F., Tulipani S., Alvarez-Suarez J.M., Quiles J.L., Mezzetti B., Battino M. The strawberry: composition, nutritional quality, and impact on human health. Nutrition. 2012;28(1):9-19. DOI: 10.1016/j.nut.2011.08.009Hossain A., Begum P., Zannat S., Rahman M.H., Ahsan M., Islam S.N. Nutrient composition of strawberry genotypes cultivated in a horticulture farm. Food Chemistry. 2016;199:648-652. DOI: 10.1016/j.foodchem.2015.12.056Hossain A., Begum P., Zannat S., Rahman M.H., Ahsan M., Islam S.N. Nutrient composition of strawberry genotypes cultivated in a horticulture farm. Food Chemistry. 2016;199:648-652. DOI: 10.1016/j.foodchem.2015.12.056Kevers C, Falkowski M., Tabart J., Defraigne J.O., Dommes J., Pincemail J. Evolution of antioxidant capacity during storage of selected fruits and vegetables. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 2007;55(21):8596-603. DOI: 10.1021/jf071736jKevers C, Falkowski M., Tabart J., Defraigne J.O., Dommes J., Pincemail J. Evolution of antioxidant capacity during storage of selected fruits and vegetables. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 2007;55(21):8596-603. DOI: 10.1021/jf071736jКуликов И.М., Айтжанова С.Д., Андронова Н.В., Борисова А.А., Тумаева Т.А. Модель промышленного сорта земляники садовой для условий средней полосы России. Садоводство и виноградарство. 2020;(3):5-10. DOI: 10.31676/0235-2591-2020-3-5-10Kulikov I.M., Aytzhanova S.D., Andronova N.V., Borisova A.A., Tumaeva T.A. A model of a commercial strawberry variety for the conditions of central Russia. Horticulture and Viticulture. 2020;(3):5-10. [in Russian] DOI: 10.31676/0235-2591-2020-3-5-10Лукъянчук И.В., Жбанова Е.В. Оценка генетической коллекции земляники по содержанию в плодах антоцианов. Вестник Томского государственного университета. Биология. 2017;(38):134-148. DOI: 10.17223/19988591/38/8Luk’yanchuk I.V, Zhbanova E.V. Estimation of genetic collection for anthocyanin content in strawberry fruits. Tomsk State University Journal of Biology. 2017;(38):134-148. [in Russian] DOI: 10.17223/19988591/38/8Макаркина М.А., Павел А.Р. Биологически активные вещества в ягодах земляники, выращенной в условиях Орловской области. Современное садоводство. 2017;2(22):10-16. DOI: 10.24411/2218-5275-2017-00021Makarkina M.A., Pavel A.R. Biologically active substances in strawberry berries grown in Orel region. Contemporary Horticulture. 2017;2(22):10-16. [in Russian] DOI: 10.24411/2218-5275-2017-00021Классификатор (Кодификатор, Descriptor list) рода Fragaria L. – Земляника / cост.: Е.В. Мажоров, В.А. Корнейчук. Санкт-Петербург: ВИР; 1992.Mazhorov E.V., Korneychuk V.A. (comp.), Classifier (Codifier, Descriptor list) of the genus Fragaria L. – Strawberries. (Klassifikator [Kodifikator, Descriptor list] roda Fragaria L. – Zemlyanika). St. Petersburg: VIR; 1992. [in Russian]Mezzetti B., Balducci F., Capocasa F., Zong C.F., Di Vittori L., Battino M. Breeding strawberry for higher phytochemicals content and claim it: Is it possible? International Journal of Fruit Science. 2016;16(1):194-206. DOI: 10.1080/15538362.2016.1250695Mezzetti B., Balducci F., Capocasa F., Zong C.F., Di Vittori L., Battino M. Breeding strawberry for higher phytochemicals content and claim it: Is it possible? International Journal of Fruit Science. 2016;16(1):194-206. DOI: 10.1080/15538362.2016.1250695Mezzetti B., Giampieri F., Zhang Y.T., Zong C.F. Status of strawberry breeding programs and cultivation systems in Europe and the rest of the world. Journal of Berry Research. 2018;8(3):205-221. DOI: 10.3233/jbr-180314Mezzetti B., Giampieri F., Zhang Y.T., Zong C.F. Status of strawberry breeding programs and cultivation systems in Europe and the rest of the world. Journal of Berry Research. 2018;8(3):205-221. DOI: 10.3233/jbr-180314Методические рекомендации MP 2.3.1.2432-08 «Нормы физиологических потребностей в энергии и пищевых веществах для различных групп населения Российской Федерации». Москва: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора; 2009.MR 2.3.1.2432-08 Guidelines “Norms of physiological requirements in energy and nutrients for different groups of population in the Russian Federation” (Metodicheskie rekomendatsii MR 2.3.1.2432-08 “Normy fiziologicheskikh potrebnostey v energii i pishchevykh veshchestvakh dlya razlichnykh grupp naseleniya Rossiyskoy Federatsii”). Moscow: Federal Center for Hygiene and Epidemiology of the Russian Federal Service on Customers’ Rights; 2009. [in Russian]Nowicka A., Kucharska A.Z., Sokół-Łętowska А., Fecka I. Comparison of polyphenol content and antioxidant capacity of strawberry fruit from 90 cultivars of Fragaria × ananassa Duch. Food Chemistry. 2018;270:32-46. DOI: 10.1016/j.food-chem.2018.07.015Nowicka A., Kucharska A.Z., Sokół-Łętowska А., Fecka I. Comparison of polyphenol content and antioxidant capacity of strawberry fruit from 90 cultivars of Fragaria × ananassa Duch. Food Chemistry. 2018;270:32-46. DOI: 10.1016/j.food-chem.2018.07.015Padula M.C., Lepore L., Milella M., Ovesna J., Malafronte N., Martelli G. et al. Cultivar based selection and genetic analysis of strawberry fruits with high levels of health promoting compounds. Food Chemistry. 2013;140(4):639-646. DOI: 10.1016/j.foodchem.2012.11.025Padula M.C., Lepore L., Milella M., Ovesna J., Malafronte N., Martelli G. et al. Cultivar based selection and genetic analysis of strawberry fruits with high levels of health promoting compounds. Food Chemistry. 2013;140(4):639-646. DOI: 10.1016/j.foodchem.2012.11.025Попова А.Ю., Тутельян В.А., Никитюк Д.Б. О новых (2021) нормах физиологических потребностей в энергии и пищевых веществах для различных групп населения Российской Федерации. Вопросы питания. 2021;90(4):6-19. DOI: 10.33029/0042-8833-2021-90-4-6-19Popova A.Yu., Tutelyan V.A., Nikityuk D.B. On the new (2021) norms of physiological requirements in energy and nutrients of various groups of the population of the Russian Federation. Problems of Nutrition. 2021;90(4):6-19. [in Russian] DOI: 10.33029/0042-8833-2021-90-4-6-19Причко Т.Г., Германова М.Г. Сравнительная оценка биохимического состава ягод земляники в условиях юга России. Плодоводство и виноградарство юга России. 2010;2(1):107-113.Prichko T.G., Germanova M.G. Comparative evaluation of biochemical composition of strawberries in the south of Russia. Fruit Growing and Viticulture of South Russia. 2010;2(1):107-113. [in Russian]Р 4.1.1672-03 Руководство по методам контроля качества и безопасности биологически активных добавок к пище. Москва: Федеральный центр госсанэпиднадзора Минздрава России; 2004.R 4.1.1672-03 Guide on methods of quality control and safety of biologically active additives in food (Rukovodstvo po metodam kontrolya kachestva i bezopasnosti biologicheski aktivnykh dobavok k pishche). Moscow: Federal Center for State Epidemiological Supervision of the Russian Ministry of Health; 2004). [in Russian]Sirijan M., Pipattanawong N., Saeng-on B. Chaiprasart P. Anthocyanin content, bioactive compounds and physico-chemical characteristics of potential new strawberry cultivars rich in-anthocyanins. Journal of Berry Research. 2020;10(1):1-14. DOI: 10.3233/jbr190487Sirijan M., Pipattanawong N., Saeng-on B. Chaiprasart P. Anthocyanin content, bioactive compounds and physico-chemical characteristics of potential new strawberry cultivars rich in-anthocyanins. Journal of Berry Research. 2020;10(1):1-14. DOI: 10.3233/jbr190487Государственный реестр селекционных достижений, допущенных к использованию. Т. 1. «Сорта растений» (официальное издание). Москва: Росинформагротех; 2020. URL: https://gossortrf.ru/wp-content/uploads/2020/03/FIN_reestr_dop_12_03_2020.pdf [дата обращения: 17.03.2021].State Register for Selection Achievements Admitted for Usage (National List). Vol. 1. “Plant varieties” (official publication). Moscow: Rosinformagrotekh; 2020. [in Russian] URL: https://gossortrf.ru/wp-content/uploads/2020/03/FIN_reestr_dop_12_03_2020.pdf [дата обращения: 17.03.2021].Thill J., Miosic S., Gotame T.P., Mikulic-Petkovsek M., Gosch C., Veberic R. et al. Differential expression of flavonoid 3’-hydroxylase during fruit development establishes the different B-ring hydroxylation patterns of flavonoids in Fragaria × ananassa and Fragaria vesca. Plant Physiology and Biochemistry. 2013;72:72-78. DOI: 10.1016/j.plaphy.2013.03.019Thill J., Miosic S., Gotame T.P., Mikulic-Petkovsek M., Gosch C., Veberic R. et al. Differential expression of flavonoid 3’-hydroxylase during fruit development establishes the different B-ring hydroxylation patterns of flavonoids in Fragaria × ananassa and Fragaria vesca. Plant Physiology and Biochemistry. 2013;72:72-78. DOI: 10.1016/j.plaphy.2013.03.019Вигоров Л.И. Сад лечебных культур. Свердловск: Средне-Уральское книжное издательство; 1976.Vigorov L.I. The garden of medicinal crops (Sad lechebnykh kultur). Sverdlovsk: Middle-Ural Book Publishers; 1976. [in Russian]Жбанова Е.В. Зависимость химического состава ягод земляники от погодных условий периода вегетации. Плодоводство и ягодоводство России. 2014;38(1):150-157.Zhbanova Е.V. Dependence of the chemical composition of strawberries on the weather conditions of the growing season (Zavisimost khimicheskogo sostava yagod zemlyaniki ot pogodnykh usloviy perioda vegetatsii). Pomiculture and Small Fruits Culture in Russia. 2014;38(1):150-157. [in Russian]Жбанова Е.В., Лукъянчук И.В., Миронов А.М. Витаминная и антиоксидантная ценность плодов сортов и отборных форм земляники селекции ФГБНУ «ФНЦ им. И.В. Мичурина». Известия Тимирязевской сельскохозяйственной академии. 2019;(6):36-48. DOI: 10.34677/0021-342x-2019-6-36-48Zhbanova Е.V., Luk’yanchuk I.V., Mironov A.M. Vitamin and antioxidant value of fruits of strawberry varieties and selected forms bred in I.V. Michurin Federal Scientific Center. Izvestiya of Timiryazev Agricultural Academy. 2019;(6):36-48. [in Russian] DOI: 10.34677/0021-342x-2019-6-36-48Зубов А.А. Теоретические основы селекции земляники. Мичуринск: ВНИИГиСПР; 2004.Zubov A.A. Theoretical foundations of strawberry breeding (Teoreticheskiye osnovy selektsii zemlyaniki). Michurinsk: I.V. Michurin All-Russian Research Institute of Fruit Crop Genetics and Breeding; 2004. [in Russian]

The authors declare that there are no conflicts of interest present.